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ELISA實驗制備抗體酶結(jié)合物的方法
日期：2025-04-17 00:58
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摘要：
酶標記的抗原或抗體稱為結(jié)合物（conjugate）。抗原由于化學(xué)結(jié)構(gòu)不同，可用不同的方法與酶結(jié)合。如為蛋白質(zhì)抗原，則可參考抗體酶標記的方法。制備抗體酶結(jié)合物的方法通常有以下幾種。
1、戊二醛交聯(lián)法：戊二醛是一種雙功能團試劑，酶和抗體中的氨基可通過該試劑進行偶聯(lián)。戊二醛交聯(lián)可用一步法（如連接 AP），也可用二步法（如連接 HRP）。偶聯(lián)方法為：2～5 mg 純抗體與 5 mg AP 混合于1ml 0.1mol/L pH6.8 的磷酸鹽緩沖液中，并用此磷酸鹽緩沖液對該酶和抗體混合液于4℃ 下透析平衡。磁力攪拌下，向酶和抗體溶液中緩慢加入1...
酶標記的抗原或抗體稱為結(jié)合物（conjugate）?？乖捎诨瘜W(xué)結(jié)構(gòu)不同，可用不同的方法與酶結(jié)合。如為蛋白質(zhì)抗原，則可參考抗體酶標記的方法。制備抗體酶結(jié)合物的方法通常有以下幾種。
1、戊二醛交聯(lián)法：戊二醛是一種雙功能團試劑，酶和抗體中的氨基可通過該試劑進行偶聯(lián)。戊二醛交聯(lián)可用一步法（如連接 AP），也可用二步法（如連接 HRP）。偶聯(lián)方法為：2～5 mg 純抗體與 5 mg AP 混合于1ml 0.1mol/L pH6.8 的磷酸鹽緩沖液中，并用此磷酸鹽緩沖液對該酶和抗體混合液于4℃ 下透析平衡。磁力攪拌下，向酶和抗體溶液中緩慢加入1％戊二醛0.05 ml，在室溫下放置2小時。在 4℃下使用 50mM pH8.0 Tris緩沖液對偶聯(lián)后的酶和抗體溶液透析平衡，即得酶標抗體。
2、過碘酸鹽氧化法本法只用于HRP的交聯(lián)。該酶含 18％ 碳水化合物，過碘酸鹽將其分子表面的多糖氧化為醛基。用硼氫化鈉（NaBH4）中和多余的過碘酸。酶上的醛根很活潑，可與蛋白質(zhì)結(jié)合，形成按摩爾比例結(jié)合的酶標結(jié)合物。有人認為此法為辣根過氧化物酶交聯(lián)有效的方法。但也有只認為由于所用試劑較為劇烈，各批實驗結(jié)果不易重復(fù)。