冷凍保存細胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)EGFR受體突變體的小鼠肺成纖維細胞
來源：BSL-1

培養(yǎng)基：DMEM高糖90%，胎牛血清10%（1521/1531）

狀態(tài)：成纖維細胞

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

公司優(yōu)勢：

1.具有多年的銷售經(jīng)驗的行業(yè)背景，我司秉承質(zhì)量優(yōu)先的理念，希望廣大科研工作者與我司達成長期的合作關(guān)系；

2.公司不僅與各大高校、科研機構(gòu)以及**性企業(yè)有著合作關(guān)系，還與國際接軌，我司代理多種知名的國際品牌，如ATCC、DSMZ、Millipore、Abcam,Serva、Pharmacia、eBioscience,Santa，Abnova，GenWay等。

相關(guān)熱銷產(chǎn)品：

巖白菜素（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： L-Glutamic acid γ-benzyl ester羥基類固脫氫酶3α抗體包裝5g

巖大戟內(nèi)酯B（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： L-Phenylalanine benzyl ester hydrochloride 同源異型盒基因HLX1蛋白抗體包裝1g

巖黃連（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： L-Proline benzyl ester hydrochloride三羥基三基輔酶A合成酶1包裝25g

鹽酸巴馬汀,鹽酸掌葉防己堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： L-Arginine L-glutamate熱休克因子1抗體包裝5g

鹽酸川芎(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： L-Arginine AKG 2:1磷酸化熱休克因子1抗體包裝1g

鹽酸番茄堿（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： S-Acetamidomethyl-L-cysteine hydrochloride熱休克蛋白71抗體包裝1g

鹽酸黃柏堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： O-tert-Butyl-L-threonine methyl ester hydrochloride微絲相關(guān)蛋白hHBrk1抗體包裝250mg

鹽酸黃連堿（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： L-Alanine isopropyl ester hydrochloride植烷酰輔酶A羥化酶2抗體包裝5g

鹽酸毛果蕓香堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Methyl L-asparaginate monohydrochlorideA型流感病H9N1神經(jīng)氨酸酶型抗體包裝1g

鹽酸青藤堿（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： L-Aspartic acid di-tert-butyl ester hydrochlorideA型流感病H9N1血凝素型抗體包裝500mg

鹽酸去氫駱駝蓬堿（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： L-Glutamine t-butyl ester hydrochloride人類狀瘤病33抗體包裝1g

鹽酸石蒜堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： L-Glutamic acid 5-tert-butyl 1-methyl ester hydrochloride A型病H1N1蛋白抗體包裝25g

鹽酸甜菜堿（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Bzl-Gly-OH·HCl型肝炎病聚蛋白VP1抗體包裝5g

鹽酸小檗（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Glycine benzyl ester hydrochloride造血干特異性蛋白抗體包裝1g

鹽酸小檗堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： L-Isoleucine t-butyl ester hydrochloride轉(zhuǎn)化生長因子β1誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子1抗體包裝250mg
B82-C1022細胞凝結(jié)芽孢桿菌Human VLDL(Very low-density lipoprotein) ELISA KitAlias: VLDL(Verylow-densitylipoprotein)ELISAKitReactivity: Human

蘇云金芽孢桿菌Human EN2(Homeobox protein engrailed-2) ELISA KitAlias: EN2(Homeoboxproteinengrailed-2)|AUTS10|engrailedhomeobox2|engrailedhomolog2|engrailed-2|Homeoboxproteinen-2|hu-En-2|Hu-En-2ELISAKitReactivity: Human

枯草芽孢桿菌Human NFKBIB(NF-kappa-B inhibitor beta) ELISA KitAlias: NFKBIB|TR-interactingprotein9|beta|IkappaBbeta|I-kappa-B-beta|IkB-B|ikB-B|IkB-beta|IKBB|ikB-beta|NF-kappa-Binhibitorbeta|NF-kappa-BIB|nuclearfactorofkappalightpolypeptidegeneenhancerinB-cellsinhibitor|Thyroidreceptor-interactingprotein9|TR-interactingprotein9|TRIP-9|TRIP9ELISAKitReactivity: Human

產(chǎn)氨棒桿菌Human HPN(Serine protease hepsin) ELISA KitAlias: HPN|TMPRSS1|hepsin|serineproteasehepsin|serineproteasehepsincatalyticchain|serineproteasehepsinnon-catalyticchain|Transmembraneproteaseserine1|transmembraneprotease|serine1ELISAKitReactivity: Human

釀酒酵母Human Rock-2(Rho Associated Coiled Coil Containing Protein Kinase 2) ELISA KitAlias: Rock-2(Rho-kinase|Rock-II|Rock2m|ROKalpha)|Rho-kinase2|Rock-II|Rock2m|ROKalphaELISAKitReactivity: Human

紅球菌Human CALU(Calumenin) ELISA KitAlias: CALU(Calumenin)|crocalbin-likeprotein|multipleEF-handprotein|Crocalbin|IEFSSP9302ELISAKitReactivity: Human

挪威假絲酵母Human NTN1(Netrin-1) ELISA KitAlias: Ntn1(Netrin1)|netrin-1|Lnetrin1|Mouse|homologofELISAKitReactivity: Human

秦氏蜜環(huán)菌Human APOA5(Apolipoprotein A-V) ELISA KitAlias: APOA5(ApolipoproteinA-V)|APOAV|RAP|Apo-AV|ApoA-V|ApolipoproteinA5|RegeneRation-associatedprotein3ELISAKitReactivity: Human
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

1.研究的對象是活細胞

在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達到比較均一性

通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器備。