主營(yíng)產(chǎn)品：
生化試劑，標(biāo)準(zhǔn)品,對(duì)照品，PCR試劑盒，?核酸檢測(cè)試劑盒，熒光定量檢測(cè)試劑盒，生化試劑盒?，比色法試劑盒，酶活性檢測(cè)試劑盒，ELISA試劑盒，酶聯(lián)免yi檢測(cè)試劑盒，試劑盒，ELISA試劑盒，抗體，重組蛋白，分光光度法檢測(cè)試劑盒，細(xì)胞株，原代細(xì)胞，細(xì)胞培養(yǎng)基，標(biāo)準(zhǔn)溶液產(chǎn)品。代理并銷售進(jìn)口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細(xì)胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產(chǎn)品。
PCR反應(yīng)條件的控制
日期：2025-04-17 14:16
瀏覽次數(shù)：44
摘要：
PCR反應(yīng)條件的控制：
1. PCR反應(yīng)的緩沖液提供合適的酸堿度與某些離子 。
2. 鎂離子濃度 總量應(yīng)比dNTPs的濃度高，常用1.5 mmol/L。
3. 底物濃度dNTP以等摩爾濃度配制，20～200 umol/L。
4. TaqDNA聚合酶2.5U(100 ul）。
5. 引物 濃度一般為0.1 ～0.5 umol/L。
6. 反應(yīng)溫度
（1）變性溫度和時(shí)間95℃，30 s。
（2）退火溫度和時(shí)間 低于引物Tm值5 ℃左右，一般在45～55℃。
（3）延伸溫度和時(shí)間72℃，1 min/kb(10 kb內(nèi)）。
（4）Tm值=4(G+C) +2(A+T)
...
PCR反應(yīng)條件的控制：
1. PCR反應(yīng)的緩沖液提供合適的酸堿度與某些離子 。
2. 鎂離子濃度 總量應(yīng)比dNTPs的濃度高，常用1.5 mmol/L。
3. 底物濃度dNTP以等摩爾濃度配制，20～200 umol/L。
4. TaqDNA聚合酶2.5U(100 ul）。
5. 引物 濃度一般為0.1 ～0.5 umol/L。
6. 反應(yīng)溫度
（1）變性溫度和時(shí)間95℃，30 s。
（2）退火溫度和時(shí)間 低于引物Tm值5 ℃左右，一般在45～55℃。
（3）延伸溫度和時(shí)間72℃，1 min/kb(10 kb內(nèi)）。
（4）Tm值=4(G+C) +2(A+T)
7. 循環(huán)次數(shù) ：一般為25 ～30次。循環(huán)數(shù)決定PCR擴(kuò)增的產(chǎn)量。模板初始濃度低，可增加循環(huán)數(shù)以便達(dá)到有效的 擴(kuò)增量。但循環(huán)數(shù)并不是可以無(wú)限增加的。一般循環(huán)數(shù)為30個(gè)左右，循環(huán)數(shù)超過(guò)30個(gè)以后，DNA聚合酶活性逐漸達(dá)到飽和，產(chǎn)物的量不再隨循環(huán)數(shù)的增加而增加，出現(xiàn)了所謂的“平臺(tái)期”。