Folin法測定蛋白含量：

1、用品和儀器：分光光度劑，試管及試管架，微量自動取液儀（20，100，200，1000UL）。

2、試劑：

試劑甲：貯液A(4g/100mlNa2CO3),貯液B(0.2mol/100lNaOH),貯液C(1g/100mlCuSO4.5H2O),貯液D（2g/100ml 酒石酸鉀鈉）臨用前將A和B等體積混合為碳酸鈉－氫氧-化鈉溶液，C與D混合盛Folin-酚試劑甲，1天內(nèi)有效。

試劑乙：取烏酸鈉100G，目酸鈉25G，置于2000ml膜口回流裝置內(nèi)，加蒸餾水700ml，85％磷酸50ml和濃鹽酸100ml，充分混勻，使其溶解。小火加熱，回流10小時（燒瓶中加入玻璃珠以防溶液外濺）再加入硫酸鋰150g蒸餾水50ml及液-溴數(shù)滴，在通風(fēng)廚開口煮沸15分鐘，以除去多余的溴，冷卻后定容與1000ml，過濾即成Folin-酚試劑乙貯存液，顏色為鮮黃色，置于棕色瓶中，可在冰箱長期保存，顏色變綠，在加幾滴溴，煮沸數(shù)分鐘，恢復(fù)原色試劑乙在使用前應(yīng)該確定其酸度，使之滴定標(biāo)準(zhǔn)氫氧-化鈉試劑(1mol/l),以酚酞為指示劑，當(dāng)溶液顏色由紅－紫紅－紫灰－墨綠即可為終點(diǎn)，酸度為2MOL/L將其稀釋到1mo/l即可。

標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液：精 確稱取結(jié)晶牛血清蛋白3mg溶于雙證水中，定容于10ML,濃度為0.3mg/ml。

實(shí)驗(yàn)方法：1.取16mm*150mm試管13支，標(biāo)明號碼，放置與試管架，在1－11號試管中分別加入標(biāo)準(zhǔn)牛蛋白血清（0.3mg/ml）0,0.1,0.2--------1.0ml,補(bǔ)足雙蒸水至每管體積1.0ml，在12，13管中加入待測樣品100UL，并補(bǔ)足雙蒸水至1.0ml。

3、加入5.0ml新配置的試劑甲，立即混勻，在室溫下放置10分鐘。

4、各管中加入0.5ml試劑乙，充分混勻，（用振蕩器），然后室溫放置30－60min。

5、將標(biāo)準(zhǔn)樣及待測樣品在可見光光度計上比色，如果蛋白含量低于500UG/ML,在750nm下比色，如果在100ug/ml之內(nèi)，則在550nm波長下比色。

6、根據(jù)已知含量的標(biāo)準(zhǔn)樣品測得的光吸收值做標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后根據(jù)待測樣品的光吸收值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出蛋白含量。