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蛋白質免 疫印跡法（WB）轉膜流程
日期：2025-04-18 02:40
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摘要：
Western Blot（WB）又稱蛋白質免 疫印跡法，是基于蛋白質SDS-PAGE電泳分離和特異性抗體識別蛋白的特性，通過顯色技術檢測目的蛋白的技術。
蛋白質免 疫印跡法（WB）轉膜流程：
小心撬開電泳凝膠板，裁取整塊分離膠并放入預冷的濕轉緩沖液，選取大小適當?shù)腘C膜，按“三明治”的形式從上到下依次擺放2層海綿、2張濾紙、分離膠、NC膜（或PVDF膜）、2張濾紙、2層海綿，組裝濕轉系統(tǒng)，灌滿預冷1× 濕轉緩沖液，沒過“三明治”，室溫100 V濕轉60 min；
tips：
1、濕轉液需提前預冷，筆者習慣電泳開始時將...
Western Blot（WB）又稱蛋白質免 疫印跡法，是基于蛋白質SDS-PAGE電泳分離和特異性抗體識別蛋白的特性，通過顯色技術檢測目的蛋白的技術。
蛋白質免 疫印跡法（WB）轉膜流程：
小心撬開電泳凝膠板，裁取整塊分離膠并放入預冷的濕轉緩沖液，選取大小適當?shù)?/span>NC膜，按“三明治”的形式從上到下依次擺放2層海綿、2張濾紙、分離膠、NC膜（或PVDF膜）、2張濾紙、2層海綿，組裝濕轉系統(tǒng)，灌滿預冷1× 濕轉緩沖液，沒過“三明治”，室溫100 V濕轉60 min；
tips：
1、濕轉液需提前預冷，筆者習慣電泳開始時將濕轉液置入制冰器或者-20℃冰箱；
2、轉模時好整塊分離膠轉膜，以免裁膠時丟失部分蛋白；
3、做“三明治”的基本原則是“黑膠白膜”，即分離膠貼近濕轉夾黑色面、NC膜貼近濕轉夾白色面（或紅色面）；
4、在制備“三明治”時，筆者習慣膜在下方、膠在上方，如此蛋白條帶順序和SDS-PAGE正面時的上樣順序完全一致，方便記憶；
5、濕轉液好是現(xiàn)配現(xiàn)用，但也可重復使用，pubmed有團隊證實濕轉液可重復使用5次，而不明顯影響實驗結果；
6、濕轉時，好在冰箱/冷室（cold room）或者置于冰盒中，在電泳時間小于1h時，筆者習慣預冷濕轉液、室溫轉膜；
7、濕轉條件亦有選擇恒流的，比如200mA，2h等，筆者所使用的濕轉條件對分子量為15-140kd的蛋白均適用；
8、PVDF膜需用甲醇預激（數(shù)秒鐘即可），使得PVDF帶正電，能更好地與帶負電的蛋白結合，而NC膜無需預處理;i、制作“三明治”時注意排除SDS-PAGE膠與NC膜之間的氣泡。