細(xì)胞凍存是指將細(xì)胞放在低溫環(huán)境，以達(dá)到減少細(xì)胞代謝的作用，從而達(dá)到對(duì)細(xì)胞進(jìn)行長(zhǎng)期儲(chǔ)存進(jìn)行保種的目的，以供后續(xù)實(shí)驗(yàn)或臨床使用。細(xì)胞凍存一般采用慢凍原則，慢凍可使細(xì)胞逐步脫水，細(xì)胞不會(huì)因?yàn)楫a(chǎn)生大的冰晶而收到損害。

原理：

當(dāng)溫度低至-70℃時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的代謝活動(dòng)及酶活性幾乎全部停止，低于-130℃時(shí)，細(xì)胞能達(dá)到佳存活率。液氮可實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的長(zhǎng)期保存。

冷凍保護(hù)劑二甲基亞砜（DMSO）能快速穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞，降低冰點(diǎn)，延緩凍存過程，同時(shí)增加細(xì)胞膜的通透性，提高細(xì)胞內(nèi)離子濃度，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而達(dá)到保護(hù)細(xì)胞的目的。

貼壁細(xì)胞凍存操作步驟：

1、預(yù)熱凍存液；

2、用PBS沖洗細(xì)胞，加入胰酶消化（此步驟同細(xì)胞傳代操作）；

3、終止消化后，重懸細(xì)胞，轉(zhuǎn)移至無菌EP管，1000rpm離心5min；

4、棄上清，加入預(yù)熱的細(xì)胞凍存液，細(xì)胞凍存佳密度為5×10^6~1×10^7/ml，一般不低于5×10^5/ml；

5、分裝完畢后，擰緊凍存管蓋并做好標(biāo)記；

6、將分裝好的凍存管轉(zhuǎn)入程序降溫盒，放入-80℃冰箱過夜；

7、將凍存管轉(zhuǎn)移至液氮長(zhǎng)期保存。

懸浮細(xì)胞凍存操作步驟：

1、用移液管將細(xì)胞懸液吹吸均勻，將細(xì)胞懸液移入離心管；

2、1000rpm離心 3 min，收集細(xì)胞沉淀；

3、用預(yù)熱的凍存液重懸細(xì)胞，細(xì)胞凍存佳密度為3-5×10^6/ml，一般不低于5×10^5/ml；

4、分裝完畢后，擰緊凍存管蓋并做好標(biāo)記；

5、將分裝好的凍存管轉(zhuǎn)入程序降溫盒，放入-80℃冰箱過夜；

6、將凍存管轉(zhuǎn)移至液氮長(zhǎng)期保存。