注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義：

羥脯氨酸（Hydroxyproline，HYP）是機(jī)體膠原蛋白主要成分之一，膠原蛋白大多分布于皮膚、腱、軟骨和血管等，因此HYP含量是反映膠原組織代謝及纖維化程度的一項重要指標(biāo)。

測定原理：

樣品經(jīng)水解產(chǎn)生游離的HYP，進(jìn)一步被氯胺T氧化，氧化產(chǎn)物與對二甲氨基苯甲醛反應(yīng)，產(chǎn)生紅色化合物，在560nm處有特征吸收峰。通過測定樣品水解液560nm吸光值，可計算HYP含量。

羥脯氨酸含量計算公式：

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=64.875x+ 0.0251，R2=0.9991

（1）按樣品重量計算

組織羥脯氨酸含量（mg/g 鮮重）=（ΔA-0.0251）÷64.875×V反總÷(V樣÷V樣總×W)

                       = 0.154×（ΔA-0.0251）÷W

（2）按xi 菌或細(xì)胞密度計算

細(xì)胞羥脯氨酸含量（mg/104 cell）=（ΔA-0.0251）÷64.875×V反總÷V樣×V樣總÷細(xì)胞數(shù)量（萬個）= 0.077×（ΔA-0.0251）÷ 細(xì)胞數(shù)量（萬個）

（3）按血清體積計算

HYP含量（mg/mL）=（ΔA-0.0251）÷ 64.875×V反總÷V樣×2

                =0.154×（ΔA-0.0251）

V反總：反應(yīng)總體積，0.3 mL；V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.06mL；V樣總：加入提取液體積， mL；W：樣本重量，g

b.用96孔板測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=32.4375x+ 0.0251，R2=0.9991

（1）按樣品重量計算

HYP含量（mg/g 鮮重）=（ΔA-0.0251）÷32.4375×V反總÷(V樣÷V樣總×W)

               = 0.308×（ΔA-0.0251）÷W

（2）按xi 菌或細(xì)胞密度計算

HYP含量（mg/104 cell）=（ΔA-0.0251）÷32.4375×V反總÷V樣×V樣總÷細(xì)胞數(shù)量（萬個）= 0.154×（ΔA-0.0251）÷細(xì)胞數(shù)量（萬個）

（3）按血清體積計算

HYP含量（mg/mL）=（ΔA-0.0251）÷32.4375×V反總÷V樣×2

                = 0.308×（ΔA-0.0251）

V反總：反應(yīng)總體積，0.3 mL；V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.06mL；V樣總：加入提取液體積， mL；W：樣本重量，g；2，血清吹干后復(fù)溶的倍數(shù)。

注意事項：

1、吸光值大于0.8，樣品適當(dāng)稀釋再測定，注意計算公式里乘以稀釋倍數(shù)。

2、試劑有一定的毒性，請操作時做好防護(hù)措施，防止吸入或與皮膚接觸。

3、zui 低檢出限為3.8mg/L。